Laporan Mikrobiologi - Isolasi dan Identifikasi Dasar Mikroba

BAB I

PENDAHULUAN

1.1             Latar Belakang

Flora mikroba di lingkungan mana saja pada umumnya terdapat dalam populasi campuran. Boleh dikatakan amat jarang mikroba dijumpai sebagai satu spesies mikroorganisme tunggal di alam. Untuk mencirikan atau mengidentifikasi suatu spesies mikroorganisme tertentu, pertama spesies harus dapat dipisahkan dari organisme lain yang umum dijumpai dalam habitatnya, lalu ditumbuhkan menjadi biakan murni, (biakan murni adalah biakan yang sel-selnya berasal dari pembelahan satu sel tunggal). Sebab dalam biakan murni semua metode mikrobiologi yang digunakan untuk menelaah dan mengidentifikasi mikroorganisme, termaksud penelaahan ciri-ciri kultural, morfologis, fisiologis maupun selogis. Memerlukan suatu populasi yang terdiri dari satu macam mikroorganisme saja.

Teknik yang digunakan dan tipe medium yang dipilih tergantung dari sifat penelitian yang pertama menumbuhkan sel spesies tertentu, yang mikroorganisme yang teramati secara mikroskopik dan yang tambah dalam lingkungan alam yang terbukti sangat sukar untuk tambah secara murni pada medium buatan. Pemeriksaan mikrobiologi bahan-bahan alami tentu mengandung berbagai lingkungan mikro yang berbeda masing-masing menyediakan tempat untuk spesies yang berbeda. Isolasi tipe tertentu mikroorganisme, jika ditanam dengan tepat, akan menghasilkan tipe organisme yang berbeda untuk tiap lingkungan mikro yang ada.

Oleh karena itu dalam mengisolasi galur murni perlu dilakukan secara bertingkat. Tingkat pertama dilakukan secara manual dengan cara mengencerkannya. Tingkat kedua digunakan media yang bersifat selektif yang masih satu golongan. Tingkat ketiga dari koloni yang seolah–olah sudah murni. Cara bertingkat tersebut adalah cara konvensional yang sampai saat ini masih banyak dilakukan. Isolasi adalah dengan cara menggoreskan, dan isolasi juga cara untuk memisahkan atau memindahkan mikroba tertentu dari lingkungannya.

Pada praktikum Isolasi dan Identifikasi Dasar Mikroba ini dilakukan untuk memberikan pemahaman kepada praktikan tentang hal yang berkaitan dengan isolasi pada mikroba dan identifikasi dasar mikroba. Karena itu, yang melatarbelakangi percobaan praktikum isolasi dan identifikasi dasar mikroba ialah untuk memelihara sejumlah mikroorganisme yaitu bakteri dan jamur dari media yang ada atau digunakan.

1.2             Tujuan

a.       Mengetahui fungsi dari isolasi mikroba

b.      Mengetahui teknik dasar dan metode dalam isolasi

c.       Mengetahui faktor-faktor yang mempengaruhi isolasi mikroba

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1             Prinsip Isolasi Mikroba

Pada prinsipnya isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lain yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba. Hal ini dapat dilakukan dengan menumbuhkannya pada media padat, karena dalam media padat sel-sel mikroba akan membentuk suatu koloni sel yang tetap pada tempatnya (Sandjaja, 1992).

Jika sel-sel tersebut tertangkap oleh media padat pada beberapa tempat yang terpisah, maka setiap sel atau kumpulan sel yang hidup akan berkembang menjadi suatu koloni yang terpisah, sehingga memudahkan pemisahan selanjutnya. Bila digunakan media cair, sel-sel mikroba susah dipisahkan secara individu karena terlalu kecil dan tidak tetap tinggal ditempatnya. Akan tetapi apabila sel-sel tersebut dipisahkan dengan cara pengenceran, kemudian ditumbuhkan pada media padat dan dibiarkan membentuk koloni, maka sel-sel tersebut selanjutnya dapat diisolasi dalam tabung-tabung reaksi atau cawan petri yang terpisah.

2.2             Cara Mengisolasi Mikroba

Pemindahan bakteri dari medium lama ke medium yang baru atau dikenal dengan istilah inokulasi bakteri ini memerlukan banyak ketelitian. Terlebih dahulu kita harus mengusahakan agar semua alat-alat yang akan digunakan untuk pengerjaan medium dan pengenceran inokulasi benar-benar steril. Hal ini untuk menghindari terjadinya kontaminasi, yaitu masuknya mikroba lain yang tidak diinginkan sehingga biakan yang tumbuh di dalam medium adalah benar-benar biakan murni. Isolasi mikroba dapat dilakukan dengan beberapa cara, yaitu:

1.    Pengenceran

Cara ini pertama kali dilakukan oleh Lister pada tahun 1865. Ia berhasil memelihara Streptococcus Laktis dalam piaraan murni yang diisolasi dalam sempel susu yang sudah masam. Suatu sempel dari suatu suspensi yang berupa campuran bermacam-macam spesies diencerkan dalam suatu tabung yang tersendiri. Dari hasil pengenceran ini kemudian diambil kira-kira 1 ml untuk diencerkan lebih lanjut. Jika dari pengenceran yang ketiga ini diambil 0,1 ml untuk disebarkan pada suatu medium padat, kemungkinan besar akan didapatkan beberapa koloni yang akan tumbuh dalam medium tersebut, akan tetapi mungkin juga hanya akan memperoleh satu koloni saja. Dalam hal yang demikian ini dapat dijadikan piaraan murni. Jika belum yakin, bahwa koloni tunggal yang diperoleh tersebut merupakan koloni yang murni, maka dapat mengulang pengenceran dengan menggunakan koloni sebagai sampel.

2.    Penuangan

Robert Koch (1843-1905) mempunyai metode lain, yaitu dengan mangambil sedikit sampel campuran bakteri yang mudah diencerkan dan sampel ini kemudian disebarkan di dalam suatu medium yang terbuat dari kaldu dan gelatin encer. Dengan demikian akan diperoleh suatu piaraan adukan. Setelah medium tersebut mengental maka selang beberapa jam kemudian nampaklah koloni-koloni yang masing-masing dapat dianggap murni. Dengan mengulang pekerjaan di atas maka akhirnya akan diperoleh piaraan murni yang lebih terjamin (Schiegel, 1996).

2.3             Metode Menanam Biakan

Ada beberapa metode yang biasanya dilakukan untuk menanam biakan di dalam medium diantaranya adalah:

1.    Metode Cawan Gores

Metode ini memiliki dua keuntungan yaitu menghemat bahan dan waktu, namun untuk memperoleh hasil yang baik diperlukan keterampilan yang lumayan yang biasanya diperoleh dari pegalaman. Metode cawan gores yang dilakukan dengan baik kebanyakan akan menyebabkan terisolasinya mikroorganisme yang diinginkan. Dua macam kesalahan yang umum dilakukan adalah tidak memanfaatkan permukaan medium dengan sebaik-baiknya untuk digores sehingga pengenceran mikroorganisme menjadi kurang larut dan cenderung untuk menggunakan inokolum terlalu banyak sehingga menyulitkan pemisahan sel-sel yang digores.

2.    Metode Cawan Tuang

Cara lain untuk memperoleh biakan koloni murni dari populasi campuran mikroorganisme ialah dengan mengencerkan eksperimen dalam medium agar yang telah dicairkan dan didinginkan yang kemudian dicawankan. Karena konsentrasi sel-sel mikroba di dalam eksperimen pada umumnya tidak diketahui sebelumnya, maka pengenceran perlu dilakukan beberapa tahap sehingga sekurang-kurangnya satu diantara cawan-cawan tersebut mengandung koloni-koloni terpisah di atas permukaan maupun di dalam agar. Metode ini memboroskan waktu dan bahan namun tidak memerlukan keterampilan yang terlalu tinggi (Gandjar, 2006).

2.4             Teknik Isolasi Mikroba

Proses pemisahan/pemurnian dari mikroorganisme lain perlu dilakukan karena semua pekerjaan mikrobiologi, misalnya telaah dan identifikasi mikroorganisme, memerlukan suatu populasi yang hanya terdiri dari satu macam mikroorganisme saja. Teknik tersebut dikenal dengan isolasi mikroba. Terdapat berbagai cara mengisolasi mikroba, yaitu:

1.    Isolasi Pada Cawan Agar

Prinsip metode isolasi pada agar cawan adalah mengencerkan mikroorganisme sehingga diperoleh individu spesies yang dapat dipisahkan dari mikroorganisme lain. Setiap koloni yang terpisah yang tampak pada cawan tersebut setelah inkubasi berasal dari satu sel tunggal. Terdapat beberapa cara dalam metode isolasi pada cawan agar, yaitu: metode gores kuadran dan metode agar cawan tuang. Metode gores kuadran bila metode ini dilakukan dengan baik akan menghasilkan terisolasinya mikroorganisme dimana setiap koloni berasal dari satu sel. Metode agar tuang berbeda dengan metode gores kuadran, cawan tuang menggunakan medium agar yang dicairkan dan didinginkan 50^oC, yang kemudian dicawankan. Pengenceran tetap perlu dilakukan sehingga pada cawan yang terakhir mengandung koloni-koloni yang terpisah di atas permukaan/di dalam cawan.

2.    Isolasi Pada Medium Cair

Metode ini dilakukan bila mikroorganisme tidak dapat tumbuh pada agar cawan (medium padat), tetapi hanya dapat tumbuh pada kultur cair. Metode ini juga perlu dilakukan pengenceran dengan beberapa serial pengenceran. Semakin tinggi pengenceran, peluang untuk mendapatkan satu sel semakin besar.

3.    Isolasi Sel Tunggal

Metode ini dilakukan untuk mengisolasi sel mikroorganisme berukuran besar yang tidak dapat diisolasi dengan metode cawan atau medium cair. Sel mikroorganisme dilihat dengan menggunakan perbesaran sekitar 100 kali. Kemudian sel tersebut dipisahkan dengan menggunakan pipet kapiler yang sangat halus ataupun mikromanipulator yang dilakukan secara aseptis.

Selain itu, cara lain yang dapat digunakan untuk mengisolasi mikroba adalah sebagai berikut:

1.    Metode Cawan Sebar (Spread Plate)

Teknik (cawan sebar) adalah suatu teknik di dalam menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara menuangkan stok kultur bakteri atau menghapuskannya di atas media agar yang telah memadat, sedangkan pour plate kultur dicampurkan ketika media masih cair (belum memadat). Kelebihan teknik ini adalah mikroorganisme yang tumbuh dapat tersebar merata pada bagian permukaan agar.

2.    Teknik Dilusi

Tujuan dari teknik ini adalah melarutkan atau melepaskan mikroba dari substratnya ke dalam air sehingga lebih mudah penanganannya. Sampel yang telah diambil kemudian disuspensikan dalam akuades steril. Teknik dilusi sangat penting dalam analisa mikrobiologi karena hampir semua metode penelitian dan perhitungan jumlah sel mikroba menggunakan teknik ini, seperti TPC (Total Plate Counter). Oleh karena itu, metode ini umum digunakan dalam isolasi bakteri (Sandjaja, 1992).

2.5             Tahap Sebelum Menanam Bakteri

Ada beberapa tahap yang harus dilakukan sebelum melakukan teknik penanaman bakteri (inokulasi) yaitu :

1.    Menyiapkan ruangan

Ruang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar tidak terjadi kesalahan dalam pengamatan atau percobaaan. Dalam laboratorium pembuataan serum vaksin dan sebagainya. Inokulasi dapat dilakukan dalam sebuah kotak kaca (encast) udara yang lewat dalam kotak tersebut dilewatkan saringan melalui suatu jalan agar terkena sinar ultraviolet.

2.    Pemindahan dengan dengan pipet

Cara ini dilakukan dalam penyelidikan air minum atau pada penyelidikan untuk diambil 1 mL. Contoh yang akan diencerkan oleh air sebanyak 99 mL murni.

3.    Pemindahan dengan kawat inokulasi

Ujung kawat inokulasi sebaliknya dari platina atau nikel ujungnya boleh lurus juga boleh berupa kolongan yang diameternya 1-3 mm. Dalam melakukuan penanaman bakteri kawat ini terlebih dahulu dipijarkan, sedangkan sisanya tungkai cukup dilewatkan nyala api saja setelah dingin kembali kawat itu disentuhkan lagi dalam nyala api, karena pada suhu yang tinggi bakteri atau mikroorganisme akan terdenaturasi dan alat menjadi steril dari mikroba pengkontaminan.

2.6              Sifat-sifat Koloni   

Sifat-sifat koloni yang tumbuh pada agar-agar lempengan, pada agar-agar miring dan pada tusukan gelatin adalah sebagai berikut:

1.    Sifat-sifat koloni pada agar-agar lempengan mengenai bentuk, permukaan dan tepi. Bentuk koloni dilukiskan sebagai titik-titik, bulat berbenang, tak teratur, serupa akar, serum kumparan. Permukaan koloni dapat datar, timbul mendatar, timbul melengkung, timbul mencembung, timbul membukit dan timbul berkawah. Tepi koloni ada yang utuh, ada yang berombak, ada yang berbelah-belah, ada yang bergerigi, ada yang berbenang-benang dan ada yang keriting.

2.    Sifat-sifat koloni pada agar-agar miring. Sifat ini berkisar pada bentuk dan tepi koloni dan sifat itu dinyatakan dengan kata-kata seperti serupa pedang, serupa duri, serupa tasbih, serupa titik-titik, serupa batang dan serupa akar.

3.    Sifat koloni tusukan dalam gelatin. Ada bakteri yang dapat mengencerkan gelatin. Karena itu, maka bentuk-bentuk koloninya juga berbeda-beda. Lagipula bentuk koloni yang tidak dapat mengencerkan gelatin. Bila dilihat dari samping koloni yang tidak mengencerkan gelatin dapat serupa pedang, tasbih, bertonjol-tonjol dan berjonjot. Jika bakteri mampu mengencerkan gelatin, maka bentuk koloninya dapat serupa kawah, serupa mangkuk, serupa corong, pundi-pundi dan berlapis. Hal tersebut bisa diamati di sekitar gelatin.

Setelah mikroba ditumbuhkan pada media agar tabung maupun cawan dan setelah inkubasi akan terlihat pertumbuhan bakteri dengan berbagai macam bentuk, ukuran, sifat, dan berbagai ciri khas yang lain. Ciri-ciri ini akan mengarahkan ke sifat-sifat mikroba tersebut pada media pertumbuhan, sehingga pengamatan morfologi ini sangat penting untuk diperhatikan (Schiegel, 1996).

BAB III

METODOLOGI PERCOBAAN

3.1             Waktu dan Tempat

Praktikum tentang isolasi dan identifikasi yang dilaksanakan pada hari Kamis tanggal 18 April 2013 pada pukul 15.30 – 17.30 WITA di Laboratorium Rekayasa Lingkungan Fakultas Teknik Universitas Mulawarman Samarinda. Kemudian pengamatan hasil isolasi dan identifikasi dasar mikroba dilaksanakan  pada tanggal 20 April 2013 dimulai dari pukul 11.00 – 12.00 WITA di Laboratorium Rekayasa Lingkungan Fakultas Teknik Universitas Mulawarman Samarinda.

3.2             Alat dan Bahan

3.2.1       Alat

1.      Labu Erlenmeyer

2.      Tabung Reaksi

3.      Rak Tabung Reaksi

4.      Magnetic stirrer

5.      Hot Plate

6.      Spatula

7.      Neraca Analitik

8.      Cawan Petri

9.      Oven

10. Incubator

11. Batang Pengaduk

12. Pipet Tetes

13. Pipet Volume

14. Lampu Bunsen

15. Bulp

16. Pinset

17. Yellow tip

18. Sprayer

19. Mikro Pipet

20. Labu Ukur

21. Medical Sterilizer

3.2.2       Bahan

1.      Potato Dextrose Agar (PDA)

2.      Nutrient Agar (NA)

3.      Larutan NaCl 0,9%

4.      Ketombe

5.      Kue Lapis Basi 1 gram

6.      Air Bersih 1500 ml

7.      Aquadest 1500 ml

8.      Alumunium Foil

9.      Tissue

10.  Sabun Cuci Piring

11.  Kertas Label

3.3             Cara Kerja

3.3.1       Pembuatan Biakan Bakteri Pada Media NA

1.      Disterilkan tangan terlebih dahulu dengan menggunakan alcohol.

2.      Ditimbang sampel berupa kue lapis basi sebanyak 1 gram.

3.      Dimasukkan sampel ke dalam tabung reaksi 10^-1 yang berisi larutan NaCl 0,9%.

4.      Dikocok hingga bercampur.

5.      Dipipet 1 ml larutan dari tabung reaksi 10^-1 ke tabung reaksi 10^-2, kemudian homogenkan.

6.      Dipipet 1 ml larutan dari tabung reaksi 10^-2 ke tabung reaksi 10^-3, kemudian homogenkan.

7.      Dipipet 1 ml larutan dari tabung 10^-3 ke dalam cawan petri.

8.      Ditambahkan 20 ml larutan NA, homogenkan dengan membentuk angka delapan, dan beri label.

9.      Diinkubasi dalam inkubator selama 24 jam dengan suhu 37^oC.

3.3.2       Pembuatan Biakan Jamur Pada Media PDA

1.      Diambil media PDA yang sudah beku.

2.      Ditotolkan ketombe pada cawan petri, dan beri label.

3.      Diinkubasi dalam inkubator selama 48 jam dengan suhu 37^oC.

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1        Hasil Pengamatan

Tabel Pengamatan Identifikasi Dasar Mikroba

No.	Gambar	Identifikasi
1.	Media NA 10-3	Tidak terdapat bakteri, hanya terdapat kontaminan. Keterangan gambar: 1.      Cawan petri. 2.      Kontaminan.
2.	Media PDA	Tidak terdapat jamur, hanya terdapat kontaminan. Keterangan gambar: 1.      Cawan petri. 2.      Kontaminan.

    

4.2        Pembahasan

Isolasi mikroba adalah proses yang dilakukan bertujuan untuk memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang terdapat di alam dan menumbuhkannya dalam satu medium buatan, sehingga diperoleh kultur murni. Kultur murni ialah kultur yang sel-sel mikrobanya berasal dari pembelahan dari satu sel tunggal. Manfaat dilakukannya isolasi adalah untuk mengidentifikasi mikroba, termasuk menelaah ciri-ciri kultural, morfologis, fisiologis, maupun serologis, yang memerlukan suatu populasi yang terdiri dari satu macam mikroorganisme saja. Prinsip isolasi mikroba adalah memisahkan satu jenis mikroba dari mikroba lainnya yang berasal dari bermacam-macam spesies mikroba

Pada percobaan pembuatan biakan dengan media PDA dilakukan isolasi dengan cara cawan tuang (pour-plate method), pertama-tama disiapkan media PDA (Potato Dextrose Agar) yang telah beku di dalam cawan petri. Kemudian diambil sampel ketombe lalu ditotolkan pada cawan petri dan dimasukkan ke dalam inkubator pada suhu 37⁰C selama 48 jam. Selain itu, pada percobaan pembuatan biakan dengan media NA dilakukan dengan cara pengenceran (dilution method), disiapkan 3 buah tabung reaksi yang telah diisi NaCl 9 ml dan diberi label masing-masing 10^-1, 10^-2 dan 10^-3. Suatu sampel yaitu kue lapis basi yang mengandung campuran bermacam-macam spesies mikroba diambil 1 gram kemudian diencerkan dalam tabung reaksi 10^-1 dan dihomogenkan. Dari hasil pengenceran ini kemudian diambil 1 ml untuk diencerkan lagi dalam tabung reaksi 10^-2 lalu dihomogenkan. Hasil pengenceran diambil kembali 1 ml dan dimasukkan dalam tabung reaksi 10^-3 dan dihomogenkan. Hasil pengenceran kemudian diambil 1 ml lalu dimasukkan ke dalam cawan petri dan ditambahkan 20 ml media NA (Nutrient Agar) dan dihomogenkan membentuk angka 8 lalu dimasukkan ke dalam inkubator pada suhu 37⁰C selama 48 jam.

   

Faktor yang dapat mempengaruhi isolasi mikroba untuk dapat tumbuh antara lain adalah:

1.    Suhu

Suatu mikroorganisme tidak akan mampu bertahan pada suhu yang tinggi, karena pada suhu yang terlalu tinggi protein dalam selnya akan mudah untuk terdenaturasi.

2.    Kelembapan relatif

Dalam suatu kondisi lembap, terdapat mikroorganisme yang akan mudah hidup. Akan tetapi, kelembapan harus disesuaikan dengan karakteristik mikroorganisme yang akan ditumbuhkan.

3.    Cahaya

Dalam suatu intensitas cahaya tertentu mikroorganisme tidak dapat tumbuh karena, Pada intensitas cahaya yang lebih tinggi, mikroorganisme tidak akan mampu mempertahankan diri dari sinar ultra violet

4.    Radiasi

Seperti yang kita ketahui, jika makhluk hidup terkena radiasi, maka radiasi tersebut akan berdampak pada struktur sel suatu makhluk hidup sehingga akan mengalami kelainan. Hal tersebut juga berdampak pada bakteri atau mikroorganisme lainnya.

5.    pH

Setiap mikroorganisme mempunyai pH yang spesifik, sehingga dalam pertumbuhannya harus disesuaikan dengan pH yang dibutuhkannya.

Pengenceran pertama kali dilakukan oleh Lister pada tahun 1865. Ia berhasil memelihara Streptococcus lactis dalam piaraan murni yang diisolasi dalam sampel susu yang sudah masam. Suatu sampel dari suatu supensi yang berupa campuran bermacam-macam spesies diencerkan dalam suatu tabung yang tersendiri. Dari hasil pengenceran ini kemudian diambil kira-kira 1 mL untuk diencerkan lebih lanjut. Jika dari pengenceran yang ketiga ini diambil 0,1 mL untuk disebarkan pada suatu medium padat, kemungkinan besar akan didapatkan beberapa koloni yang akan tumbuh dalam medium tersebut. Akan tetapi, mungkin juga hanya akan memperoleh satu koloni saja. Dalam hal yang demikian ini dapat dijadikan piaraan murni. Jika belum yakin, bahwa koloni tunggal yang diperoleh tersebut merupakan koloni yang murni, maka dapat mengulang pengenceran dengan menggunakan koloni sebagai sampel. Yang didasarkan pada prinsip pengenceran dengan maksud untuk memperoleh spesies individu. Dengan anggapan bahwa setiap koloni dapat terpisah dari satu jenis sel yang dapat diamati.

Fungsi perlakuan pada percobaan penanaman mikroba pada PDA yaitu, pengambilan sampel dengan jarum ose yang telah dipanaskan di atas bunsen sampai membara dengan tujuan mengindari kontaminasi pada alat. Kemudian sampel ditempelkan pada cawan petri yang berisi PDA untuk dibiakkan. Selanjutnya dilakukan inkubasi dengan suhu 37^oC, karena paada suhu tersebut merupakan suhu optimal untuk pertumbuhan mikroba. Fungsi perlakuan pada percobaan penanaman mikroba dengan NA yaitu, pengambilan sampel dilakukan dengan alat yang steril dimaksudkan untuk menghindari kontaminasi mikroba lain terhadap alat. Pemindahan bahan dari tabung reaksi 10^-1 ke tabung reaksi 10^-2  dan dari tabung reaksi 10^-2 ke tabung 10^-3 dilakukan di atas bunsen dengan tujuan mencegah mikroba lain yang terbawa oleh udara untuk masuk ke tabung yang berisi sampel. Selain itu, maksud dari pemindahan sampel secara berulang kali tersebut yaitu agar diperoleh biakan murni mikroba. Selanjutnya dilakukan inkubasi pada suhu 37^oC karena pada suhu tersebut merupakan suhu optimal bagi pertumbuhan mikroba.

Media NA (Nutrien Agar) adalah medium umum untuk uji air dan produk dairy. NA juga digunakan untuk pertumbuhan mayoritas dari mikroorganisme yang tidak selektif, dalam artian mikroorganisme heterotrof. Media ini merupakan media sederhana yang dibuat dari beef extract, peptone, dan agar. NA merupakan salah satu media yang umum digunakan dalam prosedur bakteriologi seperti uji biasa dari air, sewage, produk pangan, untuk membawa stok kultur, untuk pertumbuhan sampel pada uji bakteri, dan untuk mengisolasi organisme dalam kultur murni. Medium NA berfungsi untuk membiakan berbagai macam mikroorganisme serta kultur bakteri. Media PDA (Potatos Dexstose Agar) adalah merupakan media yang umum digunakan dalam kulturasi bakteri. Media PDA terdapat macam zat nutrisi organik yang digunakan dalam media biakan untuk menumbuhkan atau mengidentifikasi yeast dan kapang. Dalam suatu sampel atau produk makanan. Media PDA mengandung sumber karbohidrat dalam jumlah cukup yaitu terdiri dari 20% ekstrak kentang dan 2% glukosa sehingga baik untuk pertumbuhan kapang dan khamir tetapi kurang baik untuk pertumbuhan bakteri. Medium PDA berfungsi untuk menumbuhkan fungi jenis kapang. Penggunaan NaCl 0,9% dalam praktikum ini adalah sebagai sumber mineral mikroba yang mana dibutuhkan untuk menjaga sel mikroba tetap dalam keadaan yang isotonis. Jika hipotonis maka sel mikroba akan pecah.

Faktor kesalahan karena praktikan kurang hati-hati dan teliti pada percobaan contohnya pada praktikum kali ini yaitu ketika kita melakukan teknik pengambilan yellow tip yaitu ketika pada saat yellow tip terjatuh pada tabung sampel, hal tersebut dapat menyebabkan kontaminasi pada bahan.

Pada praktikum isolasi dan identifikasi dasar mikroba yang telah dilakukan didapat hasil adanya kontaminan pada media (Potato Dextrose Agar) PDA dan (Nutrient Agar) NA, sehingga tidak menghasilkan jamur dan bakteri pada media tersebut. Adanya kontaminan ini karena kurangnya sterilisasi yang dilakukan saat melaksanakan prosedur isolasi, seperti saat mengambil larutan dengan menggunakan yellow tip dan pipet volume. Yellow tip yang masuk ke dalam tabung reaksi saat mengambil larutan dapat mengontaminasi larutan, sedangkan pipet volume yang tidak disterilkan juga akan mengontaminasi larutan NA yang akan digunakan sebagai media. Juga pada saat menghomogenkan media dengan menggunakan angka 8, karena tidak hati-hati menyebabkan media tumpah dan terkontaminasi.

Berikut ini adalah gambar media PDA dengan jamur:   

Gambar 4.1 Media PDA dengan jamur

Jamur yang terdapat pada gambar cawan petri di atas tumbuh pada media Potato Dextrose Agar (PDA), jamur berwarna putih dengan ukuran kecil (small), bentuk filamentous, elevasi convex, dan margin filamentous ini merupakan pembiakan mikroba menggunakan bahan lain berupa jamur roti yang ditotolkan pada media PDA beku dan dimasukkan ke dalam inkubator pada suhu 37⁰C selama 48 jam.

BAB V

PENUTUP

5.1             Kesimpulan

Dari praktikum yang telah dilakukan yaitu praktikum isolasi dan identifikasi dasar mikroba yang telah dilakukan di laboratorium kita dapat membuat kesimpulan bahwa:

a.    Fungsi dari isolasi mikroba yaitu untuk memisahkan satu jenis mikroba dengan mikroba lainnya yang berasal dari campuran bermacam-macam mikroba.

b.    Teknik dasar dalam isolasi yaitu: Metode tuang (Pour plate), Metode sebar (Spread plate), Metode goresan (Streak plate), Metode pengenceran (Dilution method), Mikromanipulator (tehmicromanipulator method).

c.    Faktor yang dapat mempengaruhi isolasi mikroba yang dapat tumbuh antara lain adalah:

1.    Suhu

2.    Kelembaban relatif

3.    Cahaya

4.    Radiasi

5.    pH

5.2             Saran

Diharapkan pada praktikum selanjutnya dapat menggunakan sampel yang berbeda seperti digunakan sampel air hujan, air rendaman beras atau air kamar mandi praktikan masing-masing agar praktikan dapat mengetahui mikroba yang terdapat pada sampel tersebut yang kita gunakan dalam kehidupan sehari-hari.